Малярия относится к одним из наиболее опасных и заразных заболеваний, передающихся трансмиссивным путем (через укусы насекомых – комаров рода Anofeles). Заболевание сопровождается характерной клинической картиной – триада симптомов «озноб-жар-пот» и четкой цикличностью (приступы лихорадки могут возникать каждые 48 или 72 часа, в зависимости от возбудителя).

Наиболее восприимчивы к малярии – дети до 5 лет, беременные женщины, люди со сниженным иммунитетом (в состоянии иммунодефицита), а также, туристы, посещающие страны, эндемичные по данному заболеванию.

Важна быстрая и точная диагностика, которая позволяет своевременно назначить лечение. Препараты от малярии доступны и дают положительный эффект уже через небольшой промежуток времени после их приема.

Виды возбудителей.

Такое заболевание. Как малярия, вызывает малярийный плазмодий, это простейшее, часть жизненного цикла которого проходит в желудочно-кишечном тракте комара, откуда он и попадает в организм человека через укус.

Существует несколько видов малярийных плазмодиев:

• Plasmodium falciparum – возбудитель тропической лихорадки (одной из наиболее тяжело протекающих)
• Plasmodium vivax – возбудитель трехдневной малярии
• Plasmodium malariae – возбудитель четырехдневной лихорадки
• Plasmodium ovale- вызывает малярию, по клинической картине сходную с трехдневной

При обнаружении характерных для малярии клинических симптомов, а также, соответствующего эпидемиологического анамнеза (нахождение в тропических странах, «аэропортная малярия», нахождение в других зонах, эндемичных по малярии) необходима срочная диагностика.

Специфическая диагностика малярии заключается в микроскопии препаратов крови по типу «тонкий мазок» или «толстая капля». При использовании только общеклинических анализов, информации может быть недостаточно.

Малярия — патология, которая может угрожать жизни человека. Это паразитарное заболевание, которое переносят комары вида Anopheles. Ежегодно, количество случаев заболеваний растет, а вместе с этим растет и летальность от малярии. Более всего проблема актуальна для жителей и посетителей Африканского региона. Чаще всего, заболевание в нашей стране развивается после посещения стран Африки.

Возбудитель заболевания — паразит Plasmodium. Передача паразита происходит при укусе переносчика — самки комара Anopheles. Есть несколько видов переносчиков, каждый из которых переносит паразитов и способен вызывать случай заболевания.

Патология протекает по типу лихорадки, которая сопровождается головной болью и перепадами температуры. Заболевание может начинаться в разные сроки после заражения, что зависит от иммунитета. Важно начать лечение в максимально ранние сроки, чтобы патология не осложнилась и не привела к летальному исходу. Опасность заключается в том, что симптомы малярии неспецифические, их легко можно принять за другое заболевание, простуду или даже переутомление. Опытные инфекционисты делают акцент на том, насколько важно обращать внимание на каждое повышение температуры, которое возникает после посещение африканских стран. Даже если температура поднялась через длительное время, все равно необходимо обратиться к врачу — лучше перестраховаться и исключить малярию, чем пропустить время, благоприятное для начала лечения.

Как передается патология и какие могут быть осложнения

Передача патологии осуществляется через укус определенного вида комара. Существует около 30 видов, которые опасны в плане распространения малярии. Риск передачи возбудителя возрастает при благоприятных для инфицирования внешних и внутренних факторах. Играет роль собственный иммунитет человека, климатические условия. Также заболевание передается при переливании зараженной крови, может передаваться от матери к ребенку.

Осложнения малярии являются опасными для жизни. Наиболее серьезными состояниями являются:

• малярийная кома;

• разрыв селезенки;

• отек тканей головного мозга;

• недостаточность органов и систем организма;

• нарушение свертывающей системы крови;

• нарушения психики.

В крови циркулирует возбудитель, который приводит к формированию специфических тромбов. Это и является основным механизмом развития осложнений. Распознать малярийную кому можно по таким симптомам, как сонливость, заторможенность, снижение двигательной и рефлекторной активности, последующая потеря сознания. Данное состояние нередко приводит к развитию летального исхода, требует интенсивной терапии и жизнеобеспечивающих препаратов.

Различают также такое состояние как малярийный алгид, при котором происходит падение артериального давление, нарушение пульса, бледность, холодный пот, нарушение сознания. Разрыв селезенки можно распознать по кинжальной боли, резкой бледности, учащении пульса. Может наблюдаться развитие органной недостаточности — нарушение функции почек, печени. Из психических расстройств следует выделить бред, галлюцинации, возбуждение.

Оптимальный вариант — профилактика заболевания перед поездкой в эпидемиологически опасную местность. Если были ситуации, которые повышают риск заболевания, необходимо пройти диагностику, чтобы начать лечение на той стадии, пока еще нет симптомов и малярию можно вылечить. Обращайтесь в те лаборатории, где есть хорошие условия для проведения анализов, современная аппаратура, персонал, который соблюдает правила сбора и обработки материала, имеет опыт в диагностике заболеваний.

Современные методы диагностики малярии

Современная медицина руководствуется такими методами в диагностике малярии:

• Толстая капля (золотой стандарт);

• Тонкая капля;

• Иммунологический метод;

• Серологический метод;

• Анализ на иммуноферментный статус;

• ПЦР.

Рассмотрим подробнее данные исследования и их особенности.

-Толстая капля (золотой стандарт);

Методика позволяет оценить значительный объем крови, что особенно важно при постановке диагноза «малярия”. Если сравнивать с мазком, при оценке толстой капли удается оценить в 10 раз больше крови. Анализ проводится после нанесения нескольких капель крови на предметное стекло в лаборатории. Биоматериал распределяется таким образом, чтобы диаметр пятна на стекле соответствовал размерам монеты в 15 копеек. Либо сначала проводится мазок крови, на который наносится несколько капель, чтобы кровь образовала необходимую фигуру. Есть вариация, в которой кровь наносят на наклоненное стекло, чтобы она растекалась самостоятельно. В чистых условиях стекло с кровью высушивают, а потом окрашивают. Используется методика Романовского-Гимзы, которая подразумевает использование специфических красителей. Эритроциты при этом лизируются, то есть растворяются под действием красителя, а лейкоциты, тромбоциты и клетки с паразитами окрашиваются и становятся заметными под микроскопом. Проводится расчет пораженных клеток в отношении к лейкоцитам. Кроме малярии, с помощью этой методики можно обнаружить и другие патологии.

-Тонкая капля;

Существует также методика тонкого мазка, в котором также можно обнаружить паразитов и пораженные клетки крови. Кровь берется из пальца и наносится на предметное стекло. С помощью еще одного предметного стекла и специальной техники делается мазок крови, чтобы она распределилась тонким слоем. Тогда эритроциты не наслаиваются друг на друга, а пораженные клетки располагаются по краям пятна крови. Это позволяет сотрудникам лаборатории визуализировать клетки с паразитами, провести их подсчет и подтвердить диагноз.

-Иммунологический метод;

Иммунологические методы исследования подразумевают обнаружение антител к возбудителю или обнаружение самого паразитарного антигена. Для обнаружения антител используется метод иммунофлюоресценции. Для анализа используют мазок крови или широкую каплю. Методика несколько сложна в применении, так как составляет сложность получение антигена. Есть методики, которые подразумевают использование моноклональных антител или иммуноферментных сывороток. Данные методы больше подходят для эпидемиологических исследований.

-Серологический метод;

Серологическая диагностика основана на обнаружении комплексов антиген-антитело, что подтверждает факт заболевания. В исследуемую сыворотку добавляют антигенный реактив и, если иммунокомплексы образуются, значит у пациента есть антитела к малярийному плазмодию. А это говорит о факте заражения. Можно определить различные виды антител, основываясь на чем определяют стадию и характер патологического процесса.

-Анализ на иммуноферментный статус;

В данном случае о формировании комплекса из антитела и антигена говорит специфический фермент, который используют в качестве сигнала. Если реакция произошла, значит у пациента есть антитела к малярийному плазмодию. Если антител нету — значит заражения никогда не происходило. В зависимости от типа антител можно сказать, переболел пациент или находится в активной фазе заболевания. Метод применяется для диагностики малярии в тех странах, где нет значительных очагов патологии.

-ПЦР.

Методика основана на обнаружении элементов генетического материала паразита, из которых создается полноценная структура, с помощью которой верифицируют диагноз. Методика довольно сложная и дорогостоящая, требует специфических условий и реактивов. В то же время, это один из наиболее современных методов, который обладает значительной чувствительностью и точностью.

Причины пройти диагностику в СЗЦДМ

Лаборатория центра оснащена новейшим диагностическим оборудованием. Анализы выполняются быстро и качественно. В штате медицинских центров работают высококвалифицированные специалисты, что позволяет сделать диагностику разносторонней и эффективной. Пациент может не только установить факт заболевания, но и пройти расширенную проверку организма, а также лечение. Для наших врачей нет заболевания отдельной системы — они оценивают полноценное состояние пациента и лечат его, а не патологию. Есть возможность получить результаты исследования на личную электронную почту или получить их в распечатанном виде в медицинском центре.

Инфекции человека

Рубрики

Приготовление мазка крови и толстой капли

Приготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

1. Перед манипуляцией наденьте перчатки.
2. Подготовьте необходимое оборудование и инструментарий:

• Скарификатор одноразового использования.
• 70% раствор этилового спирта.
• Ватные шарики.
• Предметное стекло.
• Предметное стекло с шлифованной краем.
• Чашку Петри.
• Стерильный лоток.
• Лоток для отработанного материала.
• Сухое мыло.
• Марлевую салфетку.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

3. Подготовка пациента.

• Предложите пациенту сесть удобно на стул.
• Объясните ему суть манипуляции.
• Выясните, какая рука у пациента нерабочая.
• Помассируйте безымянный палец.
• Обработайте кожу ногтевой фаланги ватным шариком, смоченным 70% этиловым спиртом по всем правилам и осушите вторым (сухим) ватным шариком.
• Соблюдайте правила этики и деонтологии при общении с пациентом.

4. Приготовление мазка крови.

• Сделайте прокол кожи скарификатором.
• Первую каплю снимите сухим ватным шариком.
• Прикоснитесь нижней поверхностью предметного стекла ко второй капле на пальце на расстоянии 1-1.5 см от края стекла.
• Переверните стекло каплей вверх и возьмите в левую руку боковые ребра стекла. Капля располагается сверху и справа. Диаметр капли на стекле должен быть 2-3 мм.
• Правой рукой установите стекло с шлифованной краем слева от капли под углом 45 0 с наклоном в сторону капли. Стекло с шлифованным краем должно быть немного уже предметного стекла с каплей крови. Продвигайте шлифованный край вправо до соприкосновения с каплей и подождите, пока кровь растечется по краю шлифованного стекла.
• Не надавливая, быстрым равномерным движением проведите стеклом с шлифованной краем по предметному стеклу, пока капля не будет исчерпана. Мазок должен быть тонким и равномерным, иметь светло-розовую окраску, просвечивать, занимать ½ — ¾ стекла и заканчиваться щёточкой
• Если крови выделилось недостаточно, предложите пациенту опустить руку вниз — выжимать каплю крови нельзя!
• Не прикасайтесь предметным стеклом к коже!

5. Приготовление «толстой капли».

• На предметное стекло нанесите 2-3 капли крови на небольшом расстоянии друг от друга.
• Стеклянной палочкой или углом другого предметного стекла смешайте их. Смешивайте легко, чтобы образовалась пятно диаметром 1,5 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, иначе при высыхании образуется просто корка, которая отвалится.

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

• Подсушите мазок и толстую каплю на воздухе. На поверхности стекла ближе к началу мазка напишите номер, совпадающий с номером на направлении.
• Изготовленные препараты уложите в чашку Петри и в таком виде транспортируйте в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

Использованные источники: infection-net.ru

Биохимический анализ крови малярия
Малярия на губах мазь
Почему малярия
Малярия плазмодий в эритроцитах
Малярия признаки и диагностика

Исследование крови на малярию (толстая капля, тонкий мазок)

Где проводится: Во всех медицинских центрах и лабораториях «Тонус»

Срок выполнения: 3 рабочих дня

+ Забор материала 200 руб.

+ Забор анализа на дому (только Нижний Новгород) 200 руб.

Малярия относится к одним из наиболее опасных и заразных заболеваний, передающихся трансмиссивным путем (через укусы насекомых – комаров рода Anofeles). Заболевание сопровождается характерной клинической картиной – триада симптомов «озноб-жар-пот» и четкой цикличностью (приступы лихорадки могут возникать каждые 48 или 72 часа, в зависимости от возбудителя).

Наиболее восприимчивы к малярии – дети до 5 лет, беременные женщины, люди со сниженным иммунитетом (в состоянии иммунодефицита), а также, туристы, посещающие страны, эндемичные по данному заболеванию.

Важна быстрая и точная диагностика, которая позволяет своевременно назначить лечение. Препараты от малярии доступны и дают положительный эффект уже через небольшой промежуток времени после их приема.

Такое заболевание. Как малярия, вызывает малярийный плазмодий, это простейшее, часть жизненного цикла которого проходит в желудочно-кишечном тракте комара, откуда он и попадает в организм человека через укус.

Существует несколько видов малярийных плазмодиев:

• Plasmodium falciparum – возбудитель тропической лихорадки (одной из наиболее тяжело протекающих)
• Plasmodium vivax – возбудитель трехдневной малярии
• Plasmodium malariae – возбудитель четырехдневной лихорадки
• Plasmodium ovale- вызывает малярию, по клинической картине сходную с трехдневной

При обнаружении характерных для малярии клинических симптомов, а также, соответствующего эпидемиологического анамнеза (нахождение в тропических странах, «аэропортная малярия», нахождение в других зонах, эндемичных по малярии) необходима срочная диагностика.

Специфическая диагностика малярии заключается в микроскопии препаратов крови по типу «тонкий мазок» или «толстая капля». При использовании только общеклинических анализов, информации может быть недостаточно.

Специальной подготовки к проведению исследования крови на малярию не требуется. Единственным условием для успешно проведенного анализа является взятие крови на высоте лихорадки, так как именно в этот момент происходит высвобождение плазмодия и появляется возможность его успешного выявления.

Исследование крови на малярию показано в следующих случаях:

• Обследование пациентов, прибывших из стран, эндемичных по малярии
• Туристы, из регионов не имеющих данного заболевания, посетившие регион, где возможно заражение малярией
• Наличие лихорадки неясного происхождения, имеющей волнообразное течение
• Эпидемиологические исследования

Анализ является качественным, в результате выдается заключение о наличии или отсутствии малярийного плазмодия в крови пациента с его видовой идентификацией.

Использованные источники: www.tonuslab.ru

ВАС МОЖЕТ ЗАИНТЕРЕСОВАТЬ:
Малярия на крите
В отличие от малярии
Возбудители малярии относятся к классу
Лекарство от малярии из полыни
Выдавил малярию на губах
О мерах профилактики малярии

Исследование на малярию

15 марта 2017, 10:47 Эксперт статьи: Блинова Дарья Дмитриевна 0 5,836

Малярия — одно из опаснейших паразитарных заболеваний на планете, ежегодно поражающее сотни миллионов человек. Люди должны понимать, как проводятся исследования на малярию, как распознать симптомы и когда обратиться за лечением. Ежегодно из сотен миллионов заразившихся сотни тысяч умирают, несмотря на то, что существует лекарство, заболевание поддается лечению.

Что такое малярия?

Малярия — опасное и очень заразное паразитарное заболевание, легко передающееся через укусы комаров рода анофелис и через кровь, например, при переливании. Недуг сопровождается повторяющимися приступами лихорадки, наиболее широко распространен в странах с влажным и жарким климатом. После того как паразит попал в тело, он начинает размножаться, поражает клетки, разрушает их, лавинообразно наращивая свое присутствие. Посему решившие посетить жаркие тропические страны должны проявлять повышенную осторожность, и при наименьших подозрениях сдать анализ крови. Заражению особенно подвержены:

• люди с низким иммунитетом,
• дети до 5 лет,
• беременные женщины.

Виды плазмодий

Всего различают четыре различных вида малярии и четыре типа плазмодий, ее вызывающие:

1. Plasmodium falciparum, что провоцирует тропическую лихорадку — одну из самих опасных и нуждающихся в срочном лечении разновидностей заболевания.
2. Plasmodium vivax — провоцирует появление трехдневной малярии.
3. Plasmodium malariae — является источником четырехдневной лихорадки.
4. Plasmodium ovale — главная причина малярии овале (недуга вроде трехдневной).

Симптомы малярии

Главными (и самим очевидными) симптомами, проявляющимся при малярии, являются повторяющиеся с равными промежутками времени приступы лихорадки, повышение температуры и озноб. Длятся они несколько часов и сопровождаются такими признаками:

• повышение температуры до 41 °C;
• дрожь;
• проявления кашля;
• повышенная потливость (обычно сопровождает окончание приступа и снижение температуры).

Кроме того приступы могут сопровождаться такими явлениями как:

• расстройства пищеварительной системы,
• боль в разных частях тела, мышцах, голове,
• повышенная утомляемость,
• желтуха.

Хотя обычно симптомы при малярии проявляются спустя несколько недель после заражения, некоторые возбудители могут месяцами жить в организме незаметно. Во время острых приступов наблюдается тенденция к изменению состава крови, может возникать анемия, в особенности при тропической лихорадке. Возможно увеличение внутренних органов, например селезенки, но точную оценку может дать лишь врач.

Диагностические исследования малярии

При обнаружении вышеперечисленных симптомов необходимо срочно провести диагностику малярии. Единственным основным способом диагностирования заболевания до сих пор остается непосредственное обнаружение плазмодиев в крови, которая берется у больного во время приступов. Самые распространенные способы анализа включают взятие крови на малярию методом толстой капли и мазка. Обнаружив плазмодии, можно определить, серьезно ли болен человек, каким именно штаммом. Проводятся также общее исследование крови, обследование мочи, биохимические исследования на содержание билирубина или уровень альбумина.

Общий анализ крови

Поскольку паразит влияет непосредственно на кровь, из-за лихорадки в ее составе наблюдаются различные изменения. Таким образом, показано проведение общего обследования крови для выявления малярии. Лейкоцитоз, анемия, тромбоцитопения — вот лишь немногие возможные последствия болезни.

В общий анализ входят:

• Сравнение уровня гемоглобина, а также эритроцитов — плазмодии влияют напрямую на кровяные тельца, разрушая их во время болезни.
• Оценка показания уменьшения тромбоцитов — наблюдается у подавляющего большинства больных, является одним их характерных признаков малярии.
• Проверка лимфоцитов — их уровень тоже может меняться во время болезни.

Другие анализы

Можно также выделить ряд других анализов крови, что могут обнаружить малярию:

• Метод выявления антител к малярии — позволяет с помощью введения в организм плазмодия отслеживать реакцию иммунитета на него. Если итогом будет негативная реакция, это позволит исключить диагноз.
• Метод выявления белков плазмодия является одним из новейших возможных анализов, позволяющих определять составные молекулы возбудителя. При сравнительной быстроте способ обладает неплохой точностью, а также небольшими финансовыми затратами для пациента.
• Метод ПЦР, или полимеразная цепная реакция — непосредственно определяет генетический материал малярийного плазмодия. Проводя такой анализ крови можно определить точное число возбудителей, даже если оно небольшое. К сожалению, одним из недостатков является высокая стоимость процедуры.

Анализ толстой капли крови и мазка

Анализ мазка и толстой капли крови являются наиболее дешевыми и простыми методами обнаружения малярии. В то же время они требуют внимательности и значительных трудозатрат, а также исполнения ряда рекомендаций. При необходимости обследовать более одного пациента необходимо подготовить инструментарий заранее. При тонком мазке кровь берут из безымянного либо среднего пальца на левой руке. При изготовлении мазка палец удерживается ранкой кверху. Мазок крови — небольшой, его располагают в центре стекла.

Толстая капля отличается от мазка возможностью исследовать больший объем материала. Если обычные мазки крови— тоненькие, то капля, наносимая на стекло этим методом, имеет размер с монету. В итоге, исследуется в десятки раз больший объем крови. В дальнейшем каплю подсушивают, и после окрашивания краской Романовского, промывания — исследуют. Лучше, если анализы будет проводить опытный исследователь, ведь неподготовленный может принять за паразитов различные загрязнения или образования: бляшки Биццоцеро, обломки лейкоцитов, различные микроорганизмы, включая грибок или простейших, случайно попавших на образец.

Использованные источники: infoparazit.ru

Малярию кто разносит
Среда обитания малярии
Малярия клиника эпидемиология лечение профилактика

Лабораторная диагностика малярии. Обнаружение плазмодиев в толстой капле и мазке крови. Морфология малярийных паразитов в мазке и толстой капле.

Обнаружение плазмодиев в толстой капле и мазке крови

Паразитологический диагноз малярии основан на обнаружении паразитов в окрашенных препаратах (толстая капля и мазок) крови. Паразиты могут присутствовать в крови не только во время лихорадочных приступов и промежутков между присту­пами, следующими один за другим, но и в течение длительных периодов, на протяжении которых не наблюдается повышения температуры.

Наличие паразитов в крови при отсутствии лихорадочных при­ступов называется паразитоносительством.

Такие люди зараз­ны для комаров. При массовых обследованиях следует брать кровь вне зависимости от наличия приступов. Техника приготовления и окраски мазка — мазок готовят как обычно. После того как мазок высохнет, его фиксируют в 96%-ном этиловом спирте 15 мин или в метиловом спирте в течение 3 мин. Высушенные после фиксации мазки окраши­вают краской Романовского, разведенной дистиллированной водой, ркрашивают в течение 30—50 мин, в зависимости от качества краски. После окрашивания препарат споласкивают водой и высушивают на воздухе.

Техника приготовления и окраски толстой капли. На стекле при­готовляют мазок, а потом на еще влажный мазок дают упасть капле крови. Капля равномерно растекается, образуя круг. По­сле того как капля высохнет, на мазке простым карандашом делают соответствующую отметку. Препарат без фиксации ок­рашивают. Затем осторожно (чтобы не смыть каплю) препарат споласкивают водопроводной водой и высушивают. Мазки и толстые капли микроскопируют имммерсионной системой.

Морфология малярийных паразитов в мазке крови.

Мерозоит, внедрившись в эритроцит, превращается в молодой шизонт, имеющий вид кольца. Затем паразит, увеличиваясь, принимает амебовидную форму, при этом сохраняется просвет (вакуоль) между ядром паразита и основной частью его цитоплазмы. В цитоплазме паразита появляются зерна пигмента. Амебовид­ный шизонт заполняет значительную часть эритроцита, затем начинает округляться, вакуоль исчезает (стадия подготовки к делению), пигмент начинает собираться в отдельные пучки. Для плазмодия малярии шизонты — лентовидные формы. Ядро паразита начинает делиться, а затем цитоплазма паразита де­лится так, что к каждому дочернему ядру прилегает отдельный комочек цитоплазмы (меруляция). В результате получается кучка мерозоитов — морула. Пигмент на стадии морулы собран в одну компактную кучу.

У пл. фальсипарум скучивание пигмента наступает еще до пол­ного формирования морулы. Мерозоиты расходятся, попадают в плазму крови, часть из них погибает, часть внедряется в но­вые эритроциты.

Гамонты.

Форма гамонтов у всех малярийных паразитов, за исключением тропической малярии, круглая или слегка оваль­ная. При тропической малярии плазмодий имеет вытянутые гамонты с закругленными концами. Мужские и женские гамон­ты различаются между собой по величине и структуре ядра (интенсивности окраски цитоплазмы). Женские гамонты — яд­ро небольшое, компактное; цитоплазма красится в интенсив­ный голубой цвет. Мужские гамонты — ядро большое, цито­плазма красится бледно, часто зона вокруг ядра принимает фиолетовый оттенок.

Морфология малярийных паразитов в толстой капле.

В толстой капле, поскольку ее окрашивают в нефиксированном виде, эритроциты выщелачиваются, а малярийные паразиты претер­певают значительную деформацию. При четырехдневной и тропической малярии пораженные эритроциты в толстой капле выщелачиваются полностью, так же как и нормальные. При трехдневной малярии в толстой капле строма эритроцитов со­храняется и диагностика малярийного паразита по толстой ка­пле облегчается. Кольца в толстой капле обычно смяты, вытя­нуты в виде восклицательного знака, иногда разорваны в виде запятой. Амебовидные шизонты часто бывают уплотненными, лентовидные шизонты четырехдневной малярии в толстой ка­пле округляются и неотличимы от амебовидных шизонтов. Морулы распознаются в толстой капле легко. Цитоплазма паразитов в результате воздействия химиотерапев-тических препаратов окрашивается слабее, приобретает стекло­видный оттенок, становится вакуолизированной, распадается на отдельные комочки, ядро становится рыхлым или, наоборот, более компактным. Иногда пигмент собирается в кучки, вы­талкивает из паразита. В толстых каплях распознавание таких подвергшихся деформации паразитов становится более труд­ным, а иногда и невозможным.

Серологическая диагностика малярии включает иммунофер-ментную агглютинацию, реакцию непрямой гемагглютинации и др., которые имеют наибольшее значение в неэндемичных районах.

В мазках крови и толстых каплях малярийные паразиты могут быть приняты за мерозоит, скопление бляшек может симули­ровать морулу. В препаратах, окрашенных по Романовскому, бляшки отличаются от мерозоитов по следующим признакам: мерозоит состоит из красного ядра и голубой цитоплазмы. Фон бляшки в мазке иногда окрашивается в бледно-голубой цвет, однако ее зернистость принимает красный цвет более светлого оттенка, чем у ядер мерозоитов.

В препаратах могут быть обнаружены также посторонние мик­роорганизмы, по форме напоминающие малярийных паразитов: грибки, одноклеточные водоросли, свободноживущие простей­шие. Некоторые одноклеточные формы с компактным ядром в центре, окрашивающимся по Романовскому в ярко-красный цвет, симулируют гамонты тропической малярии. Их легко от-, лйчить по отсутствию пигмента. Свободноживущие простей­шие с одним или несколькими жгутами могут быть приняты за стадию образования мужских гамет малярийного паразита.

Комаров вскрывают и определяют наличие ооцист на желудке и спорозоитов в слюнных железах. Ооцисты видны в нативных препаратах.

Незрелые ооцисты выглядят в таких препаратах как круглые гомогенные образования с пигментом, состоящим из несколь­ких глыбок.

В зрелых ооцистах видны хорошо сформировавшиеся споро-зоиты, тесно прилегающие друг к другу. Ряды спорозоитов в виде частокола располагаются по отношению друг к другу под разными углами, в результате чего ооциста приобретает моза­ичный вид, при надавливании покровного стекла из ооцист выходят спорозоиты.

В слюнных железах спорозоиты расположены рядами перпен­дикулярно к протоку слюнных желез, а также в виде конгло­мератов. В секрете слюнных желез спорозоиты попадают в ок­ружающую жидкость, в которой хорошо заметны вследствие их подвижности.

Использованные источники: alexmed.info

Исследование крови на малярийный плазмодий делается для точной диагностики болезни. Диагноз малярии подтверждается, когда в крови обнаруживаются любые стадии развития паразита в эритроцитах.
Точность проводимой диагностики зависит от профессиональных качеств лаборанта, а также от того, как соблюдается методика проведения исследования.

Правила подготовки пациента

Анализ крови на малярийный плазмодий сдается утром натощак. Пациенту рекомендуется исключить физические и эмоциональные перегрузки, прием алкоголя накануне и курение в течение 1 часа. Диагностические и лечебные процедуры производят до взятия крови.
Допускается сдача крови в течение дня. В этом случае последний прием пищи должен быть не позднее, чем за 3 часа до сдачи крови

Как производится анализ

Для того, чтобы обнаружить в крови возбудителя малярии, необходимо брать мазок. Его берут, несмотря на то, что вероятность обнаружения паразита в капле крови в несколько десятков раз выше. Кровь берется независимо от того, какая температура у пациента.
ВОЗ рекомендует, чтобы лаборант просмотрел не менее ста капель крови в каждом поле зрения. Просмотр каждого препарата крови не прекращается до тех пор, когда не будут исследованы все подготовленные препараты в рекомендуемом количестве.
Для анализа используется капиллярная кровь. Ее берут из пальца. Допускается исследование венозной крови. Препараты крови окрашиваются по методу Романовского- Гимза (Giemsa). Используется иммерсионная система, при окуляре 7, объективе – 90.

Какие результаты дает анализ на малярию

Интенсивность заражения определяется по количеству плазмодиев. При наличии от одного до ста плазмодиев в 10 полях зрения показатель соответствует 5 – 50 паразитов в одном мкл крови.
Соответственно, если в поле зрения видно более ста паразитов, то в одном мкл крови содержится свыше 50 тыс. плазмодиев.
Интенсивность заражения также определяется количеством паразитов на 100 красных телец. Так, при поражении 10 процентов эритроцитов является неблагоприятным.

Особые случаи диагностики

В неэндемических регионах применяют серологическую диагностику малярии. Применяют методы иммунофлуоресценции, иммуноферментный анализ, реакцию непрямой гемагглютинации.
Кроме того, необходимо проводить дифференциальный анализ – с гриппом, ОРВИ, желтой лихорадкой, бруцеллезом, общим заражением крови, инфекциями органов выделения. Это делается для более точного определения диагноза малярии.

МУК 3.2.987-00

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Паразитологическая диагностика малярии

Дата введения 2001-01-01

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 19 октября 2000 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

Область применения и нормативные ссылки

1. Область применения и нормативные ссылки

Паразитологическую лабораторную диагностику малярии проводят клинико-диагностические лаборатории лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ) системы Минздрава, ведомственных учреждений, а также другие лаборатории, независимо от принадлежности и форм собственности (НИИ, вузов, Минобороны, УВД, частных клиник и т.д.), имеющие лицензию и аккредитованные в системе госстандарта и госсанэпиднадзора в установленном порядке.
Органы и учреждения государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации организуют и проводят эпидемиологический надзор за малярией, частью которого является:
контроль за уровнем лабораторной диагностики малярии в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений и других ведомств (в т.ч. исследования: 1) контрольные — не менее 10% препаратов крови, от числа отрицательных; 2) обязательные — 100% сомнительных и положительных препаратов крови с целью подтверждения лабораторного диагноза малярии);
обследование населения в очагах малярии, обследование населения по эпидпоказаниям и с консультативной целью.
В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативно-методические и правовые документы.
Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (30 марта 1999, N 52-ФЗ).
«Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан» (22 июля 1993, N 5487-1).
Санитарные правила и нормы 3.2.569-96* «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации».
_______________
* Действуют СанПиН 3.2.1333-03. — Примечание изготовителя базы данных.
Санитарные правила 3.1/3.2.558-96* «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний».
_______________
* Действуют СП 3.1/3.2.1379-03. — Примечание изготовителя базы данных.
Санитарные правила 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и гельминтами».

Общие положения

Возможность завоза малярии на территорию Российской Федерации, появление вторичных от завозных и местных случаев заболевания требуют своевременной лабораторной диагностики, необходимой для адекватного лечения и рационального проведения противоэпидемических мероприятий.
Малярию человека вызывают 4 вида паразитических простейших рода Plasmodium: Р. falciparum — возбудитель тропической малярии, Р. vivax — трехдневной малярии, Р. ovale — малярии типа трехдневной, Р. malariae — четырехдневной малярии. Неспецифические клинические проявления малярии, преимущественно в первые дни болезни, при наличии ряда объективных показателей эпидемиологического характера: географический анамнез (пребывание на территории стран с тропическим и субтропическим климатом) и клинического характера: лихорадочное состояние неясной этиологии, анемия, увеличение селезенки и ряд других — обязывают врачей лечебно-профилактических учреждений заподозрить малярию.
Безусловным подтверждением диагноза служит обнаружение малярийного паразита при микроскопическом исследовании крови. Особое значение имеет раннее выявление возбудителя тропической малярии, при несвоевременной диагностике которой возможен летальный исход. Определение вида паразита служит основанием для выбора рациональной терапии и правильной организации противоэпидемических мероприятий.

Характеристика развития малярийного паразита в эритроцитах

Проявления малярии обусловлены развитием паразита в эритроците — так называемой эритроцитарной шизогонией. В процессе эритроцитарной шизогонии образуются бесполые и половые формы паразита.
Бесполые формы за период времени, характерный для каждого вида паразита, проходят в эритроцитах ряд последовательных возрастных стадий своего развития, строение которых (морфология) и их окрашиваемость (тинкториальные свойства) хорошо различимы в «тонком мазке» крови. Трофозоиты — одноядерные растущие стадии: кольцевидные, развивающиеся (амебовидные, полувзрослые) и зрелые. Шизонты — делящиеся стадии: развивающиеся (незрелые), с последовательным делением ядер и общей цитоплазмой и зрелые, представляющие скопление дочерних клеток мерозоитов с обособленными ядрами и цитоплазмой. В динамике эритроцитарная шизогония в общем виде протекает следующим образом. Мерозоит, внедрившийся в эритроцит, быстро увеличивается в размере, в цитоплазме появляется пищеварительная вакуоль и образуется — кольцевидный трофозоит. На этой стадии цитоплазма имеет вид узкого ободка, огибающего пищеварительную вакуоль, ядро сравнительно мелкое, компактное с трудно различимой структурой хроматина, оттеснено к одному из полюсов клетки. По мере роста паразита увеличиваются его размеры, количество цитоплазмы нарастает: ядро становится более крупным, менее компактным. В цитоплазме могут появиться асимметричные утолщения, различающиеся по форме и числу, псевдоподии — образуется амебовидный трофозоит. В дальнейшем у развивающегося трофозоита постепенно исчезает вакуоль, продолжает увеличиваться ядро и количество цитоплазмы — образуется зрелый трофозоит. Зрелый трофозоит — округлая или несколько вытянутая клетка с относительно рыхлым ядром, правильной или несколько вытянутой формы, занимающая весь или часть пораженного эритроцита. Затем наступает стадия шизонта, начинается попарное деление ядер, образуется развивающийся (незрелый) шизонт. По окончании деления ядер одномоментно делится цитоплазма, обособляясь вокруг каждого из дочерних ядер — образуется зрелый шизонт, состоящий из мерозоитов; их число, размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента характерны для каждого вида плазмодиев (см. таблицы). При отсутствии или неэффективном лечении мерозоиты внедряются в интактные эритроциты, и цикл вновь повторяется с присущей для каждого вида плазмодиев продолжительностью развития одной генерации. У Р. falciparum, P. vivax, P. ovale — 48 ч, Р. malariae — 72 ч.
В процессе роста паразита в его цитоплазме появляется малярийный пигмент — продукт метаболизма гемоглобина, представляющий собой включения от едва заметных мелких зерен и гранул до относительно более крупных, неправильной формы, от золотисто-коричневого до черного цвета. Количество пигмента, размеры его частиц и распределение в цитоплазме паразита меняются по мере его перехода в последовательные стадии развития.
У части трофозоитов деления ядер не происходит и они дифференцируются в половые формы, гаметоциты — женские (макрогаметоциты) и мужские (микрогаметоциты). Мужские и женские гаметоциты различаются между собой по морфологии, в первую очередь по структуре ядра, характеру и окраске цитоплазмы. В отличие от бесполых форм гаметоциты не имеют выраженной вакуоли, характеризуются значительно более обильным и грубым пигментом. Округлая форма присуща гаметоцитам Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae, удлиненная серповидная (полулуния) — Р. falciparum. Гаметоцитов образуется меньше, чем бесполых форм. При этом женских гаметоцитов в 3-5 раз больше, чем мужских, что затрудняет выявление последних. Гаметоциты Р. vivax, Р. ovale, P. malariae значительно отличаются от гаметоцитов Р. falciparum по срокам созревания, появления в периферической крови и сохранения способности заражать переносчика (самок комара Р. anopheles).

Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae развиваются в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови. Развитие Р. falciparum происходит в синусах селезенки и мелких капиллярах внутренних органов в связи с адгезией пораженных эритроцитов к стенкам таких капилляров. В периферической крови обнаруживаются, преимущественно при неосложненном течении, только самые молодые стадии — кольцевидные трофозоиты. Их число очень быстро нарастает, поэтому при однократном исследовании периферической крови в начале болезни можно получить неправильное представление об истинном числе паразитов. При осложненном течении в периферической крови могут быть обнаружены более зрелые возрастные стадии паразита и гаметоциты в связи с нарушением сосудистого тонуса.
При оценке результатов исследования препаратов крови, наряду с типичной морфологией возбудителя, необходимо учитывать ряд особенностей, характеризующих паразитологическое развитие инфекции собственно и привходящих воздействий (предшествовавшее применение противомалярийных препаратов, неправильное приготовление и окраска препаратов крови).

Принцип метода паразитологической диагностики малярии

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом «тонкого мазка» и «толстой капли», окрашенные по Романовскому-Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.
Основной метод — «толстая капля». Благодаря распределению относительно большего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30-40 раз большее, чем в «тонком мазке», что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра «толстой капли».
Чувствительность метода «толстой капли» такова, что при просмотре 100-150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того чтобы паразиты были видимы, «толстую каплю» окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром «толстой капли» можно только, если вид паразита был первоначально установлен. «Толстая капля» относительно быстро позволяет выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения «толстой капли», но повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов позволяет предположить перенесенную недавно малярию (при отсутствии соответствующих анамнестических данных), обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяют предположить иное заболевание, не связанное с малярией.
В «тонком мазке», фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. «Тонкий мазок» крови делают в дополнение к «толстой капле». В тех случаях, когда вид возбудителя в очаге установлен, для эпиднадзора за очагом можно ограничиться методом «толстой капли».

Необходимые реактивы и оборудование

1. Этиловый спирт 96°.

2. Азур-эозин по Романовскому-Гимза (промышленный маточный раствор или сухая краска).

3. Метиленовый синий.

4. Этиловый эфир.

5. Глицерин.

6. Тетраборат натрия (бура).

7. Калий фосфат однозамещенный безводный — KHPO.

8. Натрий фосфат двузамещенный безводный — NaHPO.

9. Смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в равных частях).

10. Дистиллированная вода.

11. Индикаторная бумага (диапазон рН 5,0-8,0).

12. Фильтровальная бумага.

13. Химическая посуда: мерные цилиндры или стаканы на 10, 50 и 100 мл; градуированные центрифужные пробирки; колбы и стаканы; стеклянные палочки.

14. Предметные стекла

15. Шлифованные стекла.

16. Фарфоровая ступка с пестиком.

17. Аптечные равноплечие или электронные весы.

18. Эмалированные кюветы.

19. Пинцеты.

20. Часы песочные или сигнальные.

21. Стеклянные мостики или специальные контейнеры для окрашивания препаратов крови.

22. Скарификаторы стерильные одноразовые.

23. Бинты стерильные, вата.

24. Перчатки резиновые.

25. Микроскоп с осветителем (объективом х90 или х100, окуляром х7; х10).

26. Термостат.

27. Холодильник.

Техника паразитологической диагностики

6.1. Подготовка предметных стекол

1. Предметные стекла новые замачивают в мыльном растворе, нагревают до 60-80 °С, но не кипятят.

2. Каждое предметное стекло протирают ветошью с обеих сторон в этом растворе.

3. Промывают в проточной воде в течение 2-3 ч, периодически перемешивая.

4. Погружают в дистиллированную воду на 30 мин.

5. Проверяется качество отмывки предметных стекол от щелочи: на предметное стекло наносят 1 каплю фенолфталеина — появление розовой окраски раствора свидетельствует о недостаточной отмывке от щелочи.

6. Стекла протирают чистой хлопчатобумажной тканью и помещают для обезжиривания в смесь Никифорова (из расчета 1 мл смеси на 1 стекло), где они могут храниться в течение длительного времени.

7. Извлеченные пинцетом из смеси Никифорова стекла протирают хлопчатобумажной стираной материей, заворачивают в чистую гладкую не ворсистую (!) бумагу небольшими партиями и стерилизуют.
Стекла, многократно бывшие в употреблении, для приготовления препаратов крови использовать не рекомендуется. При необходимости их использования, следует удалить следы иммерсионного масла простиранной ветошью, затем отмыть каждое стекло от окрашенных препаратов крови в теплом мыльном растворе (для этой цели удобно использовать зубную щетку с коротко срезанной щетиной). Дальнейшая обработка — такая же, как и новых стекол.

Во время манипуляций с чистыми предметными стеклами их следует брать только за боковые поверхности или пинцетом.

6.2. Приготовление и хранение реактивов

6.2.1. Раствор краски Романовского-Гимза

Маточный раствор краски Романовского-Гимза (промышленный или приготовленный из сухой субстанции) представляет собой густую темно-фиолетовую жидкость, которую можно хранить длительное время в хорошо закупоренных бутылях из темного стекла в сухом защищенном от света прохладном месте (но не в холодильнике). Для текущей работы перед приготовлением рабочего раствора краски Романовского-Гимза необходимое количество маточного раствора краски, отливают в небольшой флакон, обязательно фильтруя, т.к. при хранении маточного раствора может выпасть осадок. Краску следует набирать сухой пипеткой или отливать через горлышко. Для определения качества краски рабочим раствором каждой новой серии производят пробное окрашивание мазков крови.
Для приготовления маточного раствора из сухой краски Романовского-Гимза необходимы следующие реактивы:
азур-эозин — 10 г;
глицерин — 100 мл;
спирт этиловый 96° — 900 мл.
Техника приготовления краски предусматривает следующие этапы:

1. Азур-эозин тщательно растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством спирта и глицерина до получения кашицеобразной массы и сливают в колбу или бутыль из темного стекла. Затем постепенно добавляют остальной спирт и глицерин.

2. Полученную взвесь тщательно встряхивают в течение 10 мин 2-3 раза.

3. Емкость с краской помещают в термостат при температуре 37° на 3-5 дней для созревания краски с ежедневным встряхиванием этой емкости вручную не менее 10 мин. При наличии магнитной мешалки встряхивание можно продолжать несколько часов. При наличии подогревателя в мешалке взвесь можно подогревать, при этом подогрев не должен превышать 40-50°, периодически подогреватель следует выключать с тем, чтобы температура не повышалась выше указанного уровня. Встряхивание и подогрев улучшают качество краски.
После каждого встряхивания раствор снова помещают в термостат.

4. Через 3-5 дней готовый раствор краски фильтруют через бумажный фильтр.

6.2.2. Буферный раствор

Необходимые реактивы:

1. Дистиллированная вода — 1 л.

2. Фосфат калия однозамещенный безводный — KHPO — 0,27 г.

3. Фосфат натрия двузамещенный безводный — NaHPO — 0,67 г.
Техника приготовления:

1. Соли растворить в дистиллированной воде (1/3 объема) комнатной температуры, после полного растворения довести до метки 1000 мл и размешать.

2. Приготовленный раствор должен иметь рН 7,0±0,2. Точное соблюдение требуемой реакции буфера важно для правильной окраски. Если рН<6,8, то следует добавить NaHPO, если рН>7,2, то добавляется KHPO. Количество реактивов, необходимых для доведения рН, подбирается опытным путем.
Буферный раствор следует хранить в хорошо закупоренной посуде в холодильнике (до 1 месяца). Для приготовления краски используется буферный раствор комнатной температуры. Нельзя использовать буферный раствор с осадком, который после окраски затрудняет просмотр препарата и даже может привести к диагностическим ошибкам. Периодически следует проверять рН буферного раствора, особенно при искажении цвета окрашенных элементов крови.

6.3. Взятие проб крови для исследования на малярию

1. Кровь для паразитологического исследования берут из пальца руки (у взрослых — обычно безымянного, у детей — из большого), у новорожденных детей — из большого пальца ноги (но не мочки уха).

2. Периферическую кровь для исследования берут вне зависимости от температуры тела и клинических проявлений.

3. Для прокола кожи пальца используют стерильные одноразовые скарификаторы или специальные стерильные разового использования иглы.

4. В целях безопасности пациента взятие крови на малярию производят на стерильные предметные стекла, т.к. во время взятия крови возможно их касание к месту прокола.

5. Перед проколом кожу пальца тщательно протирают ватным тампоном, смоченным в 70%-ном спирте, чем достигается не только предупреждение инфицирования места прокола, но и попадание с кожи пальца бактерий, различных посторонних частиц на препарат крови, которые могут затруднить диагностику при микроскопии.

6. Первую каплю крови, выступившую после прокола, вытирают сухим стерильным ватным тампоном, чтобы избежать фиксации эритроцитов остатками спирта, которым дезинфицировали кожу.

7. Последующие капли (выступающие самостоятельно или при надавливании на палец массирующими движениями) используются для приготовления препаратов крови. При этом кровь забирают в стерильный сухой гематологический капилляр, из которого быстро переносят на предметное стекло, либо выступившую кровь непосредственно из прокола пальца наносят на предметные стекла. Если кровь набирают в капилляр, то можно использовать не стерильные стекла, но подготовленные так же, как описано в п.6.1.

8. От одного пациента готовят не менее 2-3 стекол с «толстыми каплями» и 2-3 «тонких мазка» крови. Рекомендуется первоначально окрасить по одному стеклу, с тем чтобы иметь возможность исправить дефекты окраски.

При косвенных показаниях (анамнестических, эпидемиологических, клинических) о наличии малярии у обследуемого, но отрицательном первичном результате, кровь исследуют повторно через каждые 6-12 часов в течение 2-х суток.

6.4. Приготовление препаратов крови, их маркировка и фиксация

6.4.1. Препарат «толстая капля»

1. Препарат «толстая капля» на предметном стекле без мазка (рис.1):
на предметное стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм, кровь распределяют в равномерный диск или прямоугольник размером 1-1,5 см.
на краю стекла делается мазок в виде полоски крови для маркировки препарата, при массовых обследованиях делаются две полоски, где наносят маркировку.

Рис.1. «Толстые капли» на предметном стекле без мазка

Рис.1. «Толстые капли» на предметном стекле без мазка

2. Препарат «толстая капля» на мазке (рис.2):
на предметном стекле готовят мазок крови более толстый, чем требуемый для исследования на малярию;
сразу после приготовления мазка, пока мазок не высох, его влажной поверхностью прикасаются к выступившей капле крови или наносят кровь из капилляра;
кровь на влажном мазке распределится в равномерный диск при осторожных наклонах предметного стекла под небольшим углом в разные стороны; чем больше взятая капля крови, тем больше площадь, по которой она распределится.

Рис.2. «Толстые капли» на мазке

Рис.2. «Толстые капли» на мазке

Капля крови, нанесенная на мазок, более прочно прикрепляется, чем нанесенная непосредственно на предметное стекло. Толщина «толстой капли» должна быть такой, чтобы через нее просматривался печатный текст. Слишком толстая капля может оторваться от стекла при высушивании; такой препарат непригоден для исследования.
Независимо от методики приготовления показателем достаточного содержания крови в «толстой капле» является обнаружение в 1 поле зрения микроскопа в среднем 10-15 лейкоцитов (увеличение: объектив х90-100, окуляр х7).

3. Комбинированные препараты (рис.3).

Рис.3. Комбинированное приготовление препаратов крови

Рис.3. Комбинированное приготовление препаратов крови

В целях экономии стекол, особенно при массовых обследованиях, на предметном стекле одновременно готовят «тонкий мазок» и «толстую каплю».
Этот метод, однако, требует ряда предосторожностей. Для того чтобы оба препарата были пригодны для исследования, необходима четкая последовательность их обработки. Необходимо начинать с окраски «толстой капли» погружением соответствующего участка предметного стекла в раствор краски. Затем фиксируют «тонкий мазок» и окрашивают его. Нельзя начинать с фиксации «тонкого мазка», т.к. даже при очень аккуратном погружении в фиксирующую жидкость участка предметного стекла, на который нанесен «тонкий мазок», в «толстой капле» эритроциты могут подвергнуться фиксации парами фиксатора. При последующей окраске такая капля станет непригодной для исследования, даже если фиксация была неполной.
Все препараты высушивают на воздухе. Для ускорения высыхания «толстых капель» можно использовать обычный комнатный вентилятор.

Высушивание на солнце, огне или любом другом источнике тепла исключается, так как препарат становится непригодным для исследования.

Особенно это относится к «толстой капле», которая под действием тепла подвергается аутофиксации и необходимый гемолиз при окраске не наступает. «Толстые капли» (особенно в процессе высыхания) и фиксированные «тонкие мазки» следует беречь от тараканов, мух и муравьев, съедающих кровь.

6.4.2. Препарат «тонкий мазок » (рис.4)

Рис.4. «Тонкий мазок» крови

Рис.4. «Тонкий мазок» крови

2. Предметное стекло с нанесенной каплей кладут на горизонтальную поверхность стола, при этом край стекла с каплей крови должен быть справа*.

3. Двумя пальцами левой* руки предметное стекло за боковые поверхности фиксируется на столе.

4. Край шлифованного стекла (фиксированного в правой* руке) ставится под углом 45° к предметному стеклу, прикасаясь к левому* краю капли крови.

5. После того как капля растекается по касательной линии в месте соприкосновения обоих стекол, шлифованное стекло быстрым движением продвигают справа налево* к противоположному краю предметного стекла, постепенно ослабляя давление на предметное стекло, что позволяет закончить «тонкий мазок» бахромчатой частью, где наиболее четко видны специфические особенности морфологии паразитов и изменения пораженных эритроцитов. Мазок крови должен быть тонким, равномерным, не доходить до конца и краев предметного стекла, заканчиваться бахромчатым краем (рис.4).
________________
* Для лаборанта левши читать вместо левого положения — правое, вместо правого — левое.
Если угол наклона шлифованного стекла увеличить, то мазок получится короткий и толстый, с расположением эритроцитов в несколько слоев (это маскирует некоторых паразитов, а также приводит к их деформации); если уменьшить угол наклона, то трудно создать бахромчатую часть мазка. Качество «тонкого мазка» зависит также от правильной подготовки предметного стекла и равномерности края шлифованного стекла.
На плохо вымытом жирном стекле и при дефектах на краю шлифованного стекла «тонкий мазок» получается неравномерным и с просветами. Возможные дефекты тонких мазков показаны на рис.5.

Рис.5. Дефекты приготовления «тонких мазков»

Рис.5. Дефекты приготовления «тонких мазков»

6.4.3. Маркировка препаратов крови

1. Высохшие препараты крови маркируют простым карандашом (он не смывается во время фиксации и окрашивания).

2. Маркировка включает фамилию и инициалы или номер истории болезни (можно номер страхового полиса), или порядковый номер по списку обследуемого и, обязательно, дату взятия крови.

3. Препарат «толстая капля», приготовленный непосредственно на предметном стекле, маркируют на полоске крови.

4. Препарат «толстая капля» на подкладке маркируют по мазку, не задевая каплю.
5. «Тонкий мазок» маркируют в толстой части (не следует делать надпись вдоль всего мазка).

6.4.4. Фиксация «тонких мазков»

1. Фиксацию мазков проводят: в этиловом спирте 96% — 10 мин или в смеси Никифорова — 20 мин.

2. Мазки погружают и извлекают из фиксирующей жидкости пинцетом.
Препараты по окончании фиксации высушивают на воздухе.

Препарат «толстая капля» не фиксируют!

При длительном хранении (особенно в жарком климате) неокрашенных «толстых капель» может произойти их аутофиксация. При необходимости хранения «толстых капель» для предотвращения аутофиксации препараты до окраски следует обработать забуференным раствором метиленового синего (1 г метиленового синего + 3 г NaHPO + 1 г KHPO + 300 мл дистиллированной воды). «Толстую каплю» после высыхания погружают в этот раствор на 1 секунду, промывают водой и высушивают. В таком виде каплю можно хранить длительное время. Перед исследованием окрашивают по Романовскому меньше, чем обычное время — в течение 6-10 минут.

6.5. Окраска препаратов крови

Одним из основных условий правильной паразитологической диагностики малярии является качественная окраска препаратов крови.

6.5.1. Приготовление рабочего раствора краски Романовского-Гимза

Для окрашивания препаратов крови используется 5% или 10% водный рабочий раствор краски Романовского-Гимза.

1. Маточный раствор краски Романовского-Гимза (промышленного изготовления или приготовленный из сухой краски) перемешать и обязательно профильтровать.

3. Готовый рабочий раствор перемешать.

4. При необходимости ускорения получения ответа можно использовать 20%-ный раствор, сократив время окраски до 15-20 мин.

Рабочий раствор для окраски препаратов крови использовать только свежеприготовленный!

Качество каждой новой серии краски необходимо оценить. С этой целью производят пробную окраску препаратов «тонкого мазка» и «толстой капли» крови от здорового человека (если нет крови с малярийными паразитами). Концентрацию рабочего раствора и время окрашивания можно подобрать самостоятельно, т.к. они зависят от качества исходного раствора краски и от температуры окружающей среды.
Показатели качественного окрашивания. Правильно окрашенный препарат макроскопически имеет синий цвет с сиреневым оттенком, а при его микроскопии:
ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с различимой структурой;
зернистость базофилов фиолетового цвета;
зернистость эозинофилов красного цвета;
у моноцитов на фоне серо-голубой цитоплазмы может быть розовая зернистость;
зрелые эритроциты — розового цвета с сероватым оттенком;
ретикулоциты — сиренево-голубые;
тромбоциты — сиренево-розового цвета с различимой сетчатостью.
Иногда в промышленных сериях маточного раствора краски Романовского недостаточно азура, что обусловливает слабое окрашивание азурофильных элементов (ядер малярийных паразитов и лейкоцитов, зернистости пораженных эритроцитов и лейкоцитов). Результаты окрашивания мазков и капель могут быть значительно улучшены при добавлении к рабочему раствору краски Романовского так называемой синьки Мансона, которую готовят впрок следующим образом: 1,5 г метиленового синего и 2,5 г буры растирают в ступке и добавляют к 100 мл дистиллированной воды. Для созревания флакон с краской оставляют на 10-12 дней при комнатной температуре. Процесс созревания можно ускорить, поместив флакон на водяную баню на 40-60 мин при 60-80°.

Раствор не кипятить!

Синька Мансона при хранении в темном сухом месте пригодна к использованию в течение многих лет. Количество краски Мансона, добавляемое к рабочему раствору краски Романовского, устанавливают опытным путем: нередко достаточно добавить к 1 л рабочего раствора несколько капель краски.

6.5.2. Способы окрашивания и промывки «тонкого мазка» и «толстой капли » по Романовскому-Гимза

Окрашивание препаратов крови можно проводить двумя способами.